核酸電気泳動時間を10分に短縮する方法は?

核酸電気泳動は、多くの場合、時間を奪い、ゲルを過熱し、忙しいラボで意思決定を遅らせるなど、必要以上に遅くなります。

痛み: ジェルに時間がかかりすぎる理由

ほとんどのチームは、30〜60分のランを「通常」として受け入れています。しかし、長期的には実際のコストが隠されています。熱が蓄積し、バンドがぼやけ、PCRから次のステップまでの時間が失われます。従来のTAE/TBEバッファーは、より高い電界強度での速度を想定して設計されていませんでした。電圧を押すとゲルが温まります。長く押すと、移行が歪んだり、回復が不十分になったりするリスクがあります。にじみを修正するためにジェルを再実行すると、数分以上のコストがかかります - 信頼性が低下し、ワークフローが詰まります。

お客様との会話から、同じ問題点を何度も聞いています。研究者は、PCR産物の迅速なチェック、失速しないハイスループットスクリーニング、ライゲーションやゲル回収に直接進むことができるクリーンバンドを求めています。調達担当者は、長持ちし、定期的な交換を必要としない消耗品を求めています。Longlight Technologyでは、下流の性能を犠牲にすることなく、核酸電気泳動を5〜10分で確実に終了できるとしたらどうなるかという単純な質問をしました。

❓ ラボは私たちに何を教えてくれますか?

過熱、キャスティングとランニングの間の緩衝強度の不一致、および下流のステップに対する不安により、速度が制限されます。チームは、ライゲーション、抽出収量、またはRNAの安定性を心配するため、バッファーの変更を躊躇します。スピードと品質のどちらかを選択する必要はありません。

(フィギュアre 1. 0.8%アガロースゲルへの超高速走行緩衝液の塗布レーン 1: D12000

はしご(5 μL);レーン2:4 μL;レーン3:3 μL;レーン4:2 μL;レーン5:1 μL)

(像 2.超高速実行バッファの応用

1%アガロースゲル。レーン1:D5000ラダー(5 μL);レーン2:4 μL;レーン3:3 μL;レーン4:2 μL;レーン5:1 μL)

(図3.超高速実行バッファの応用

2%アガロースゲル。レーン1:D1000ラダー(5 μL);レーン2:4 μL;レーン3:3 μL;レーン4:2 μL;レーン5:1 μL。

• 超高速ランニングバッファーは、図に示すように、さまざまな濃度のアガロースゲル(0.8%、1%、2%)と完全に互換性があります 1–3.ゲル濃度に関係なく、核酸バンドは優れた分解能と透明度を維持し、異なるサイズの DNA 分子を分離するための実験ニーズを保証します。

修正:超高速実行バッファの説明

我が 50x 超高速実行バッファ は、アガロース核酸電気泳動専用に構築された低イオン強度製剤です。イオン負荷が少ないということは、特定の磁場での熱が少ないことを意味します。適切なアガロース濃度と組み合わせると、最大25〜30 V/cmで自信を持って操作でき、30分かかることが多いランをわずか5〜10分に圧縮できます。直接対決では、チームは通常、標準の1x TAEまたは1x TBEよりも~2.5〜3倍速い分離を実現します。

使い方

イオン強度が低いとジュール熱が減少し、高電圧でシャープなバンドを維持するのに役立ちます。この熱安定性により、DNAとRNAの分解能を維持しながら、速度を可能にします。同様に重要なのは、この化学反応が下流に優しいことであり、DNAゲルの抽出やライゲーションを妨げないため、クローニング、クリーンアップ、定量に直接移行できます。

- 高速ターンアラウンド:25 - 30 V/cmで5 - 10分の運転

- シャープバンド:高電界強度下でも高解像度

• 下流の互換性:ゲルの回収やライゲーションに影響を与えない

- より高い回復率:TAE/TBEの回復性能を頻繁に上回る

- 再利用可能なバッファ容量:複数の用途に対応する強力なバッファリング

• クイックセットアップ

バッファーを1:50に希釈して、1xの作業溶液(たとえば、20 mLの50xを980 mLの蒸留水に調製します)。1xを室温で保管してください。最高の一貫性を得るには、同じバッチの1xを使用してゲルをキャストして実行します。異なるバッチを混合すると、ゲル界面でのバッファー強度が変化する可能性があります。異常な移行を誘う1倍未満に希釈しないでください。

動作条件

ゲル長25〜30 V / cmで実行し、タンクの形状と熱挙動に基づいて調整します。他の高磁場実行と同様に、電源の制限を確認します。電流または電圧がドリフトダウンする場合は、機器が電流または電力に上限を設けているかどうかを確認してください。染色は柔軟で、ジェルに染料を加えるか、ラン後に染色するか、どちらも機能します。

• 安全性と安定性

連続運転や周囲温度が高いと、バッファー温度が上昇する可能性があります。必要に応じて、ユニットを冷却するか、氷の上に置いて解像度を保護します。精度を維持するために、バッファーを定期的に交換してください。50倍のストック溶液と1倍の作業溶液の両方を室温で保管してください。推奨条件下では、安定性は受領から少なくとも 12 か月です。いつものように、白衣と使い捨て手袋を着用してください。この製品は、専門家による研究用を目的としています。

現実世界の利益と開始方法

速度が信頼できる場合、下流のすべてが改善されます。5〜10分のゲルで、PCRのチェック、ライブラリの調製の調整、またはライゲーションの検証を、一日を狂わせることなく行うことができます。ハイスループットグループの場合、より高速なゲルがキューの詰まりを取り除き、スループットを向上させます。つまり、昼食前により多くのデータが得られ、夕方の再放送が減ります。

Longlight Technology では、チームが仮説と結果の間のループを短縮できるように、このバッファーを構築しました。パイロット展開では、ラボは、従来のバッファーと比較して、より高いフィールドでのバンドのクリーンさ、ライゲーションへのスムーズなハンドオフ、ゲル抽出収量の向上を報告しました。再利用性と濃縮された50倍フォーマットは、1本のボトルで大いに効果があり、強力なバッファ容量により、実行中の交換が少なくなります。

迅速な核酸電気泳動のベストプラクティス

• 一貫性を保つために、同じ 1x バッチでキャストして実行します。

•25 V / cmから始めて、セットアップが許す限り30 V / cmに向かって移動します。

- より長い実行シーケンスでバッファー温度を監視します。必要に応じて冷やします。

• TAE/TBEキャストゲルを高速バッファーに落下する場合は、電圧を200 V未満に保ちます。非常に高い電圧は、そのシナリオで結果を歪める可能性があります。

• 輝く場所

短い検証実行、クローニング中の迅速なチェック、数十のPCRアンプリコンのスクリーニング、および従来のシステムでは通常クロールするRNAワークフローの高速化。チームが結果に基づいて行動するよりもジェルを待つ時間の方が長い場合、利益はすぐに得られます。

Finaの考え

核酸電気泳動の時間を10分に短縮する準備はできていますか?今すぐLonglight Technologyにご相談いただき、サンプルのリクエスト、SOPテンプレートの入手、またはゲルボックスの互換性の確認をお願いします。ボトルネックからのゲルランを簡単なチェックポイントに変えて、実験を進めましょう。