核酸電気泳動時間を10分に短縮する方法は?

核酸電気泳動は、必要以上に遅く進むことが多く、時間を奪ったり、ゲルを過熱させたり、忙しい研究室での意思決定を遅らせたりします。

痛み: ジェルに時間がかかりすぎる理由

ほとんどのチームは30〜60分のランを「普通」として受け入れています。しかし長期走は実際のコストを隠しています。熱が溜まり、帯がぼやけ、PCRから次のステップまでの間に時間を失います。従来のTAE/TBEバッファーは、より高い電界強度での速度を想定して設計されていませんでした。電圧を上げるとジェルが温まります。長引くと、移動の歪みや回復不良のリスクがあります。ジェルを塗り直して塗り直すのは数分以上かかります。自信を失い、ワークフローを詰まらせます。

お客様との会話から、同じような悩みを何度も聞きます。研究者たちは、PCR産物の迅速な検査、停滞しない高スループットスクリーニング、そしてライゲーションやゲル回復に直接進めるクリーンバンドを求めています。調達部門は長持ちし、頻繁に交換する必要のない消耗品を求めています。Longlight Technologyでは、私たちはシンプルな質問を投げかけました。もし核酸電気泳動が、下流性能を犠牲にせずに5〜10分で確実に完了できたらどうでしょうか?

❓ ラボは私たちに何を教えてくれますか?

過熱、キャストとランニング間のバッファ強度の不安定さ、そして下流のステップへの不安が速度を制限します。チームは、結合、抽出収量、RNAの安定性を懸念してバッファーの変更をためらいます。スピードと品質のどちらかを選ばなければならないべきではありません。

(フィギュアre 1. 0.8%アガロースゲルへの超高速走行緩衝液の塗布レーン 1: D12000

はしご(5 μL);レーン2:4 μL;レーン3:3 μL;レーン4:2 μL;レーン5:1 μL)

(像 2.超高速実行バッファの応用

1%アガロースゲル。レーン1:D5000ラダー(5 μL);レーン2:4 μL;レーン3:3 μL;レーン4:2 μL;レーン5:1 μL)

(図3.超高速実行バッファの応用

2%アガロースゲル。レーン1:D1000ラダー(5 μL);レーン2:4 μL;レーン3:3 μL;レーン4:2 μL;レーン5:1 μL。

• 超高速ランニングバッファーは、図に示すように、さまざまな濃度のアガロースゲル(0.8%、1%、2%)と完全に互換性があります 1-3.ゲル濃度に関係なく、核酸バンドは優れた分解能と透明度を維持し、異なるサイズの DNA 分子を分離するための実験ニーズを保証します。

修正:超高速実行バッファの説明

我が 50x 超高速実行バッファ はアガロース核酸電気泳動専用に作られた低イオン強度の製剤です。イオン負荷が少なければ、同じ場での熱も減ります。適切なアガロース濃度と組み合わせれば、最大25〜30 V/cmで自信を持って動作でき、30分かかることが多いランを5〜10分に圧縮できます。直接対決では、通常、標準的な1回のTAEや1回のTBEよりも約2.5〜3倍の速い分離速度が見られます。

仕組み

イオン強度が低いとジュール熱が減少し、高電圧でシャープなバンドを維持するのに役立ちます。この熱安定性により、DNAとRNAの分解能を維持しながら、速度を可能にします。同様に重要なのは、この化学反応が下流に優しいことであり、DNAゲルの抽出やライゲーションを妨げないため、クローニング、クリーンアップ、定量に直接移行できます。

・高速回転:25〜30 V/cmで5回10分のラン

- シャープバンド:高電界強度下でも高解像度

• 下流の互換性:ゲルの回収やライゲーションに影響を与えない

- より高い回復率:TAE/TBEの回復性能を頻繁に上回る

- 再利用可能なバッファ容量:複数の用途に対応する強力なバッファリング

• クイックセットアップ

バッファーを1:50で希釈して1倍の作業液(例:50倍の20mLを980mLの蒸留水に混ぜる)を準備します。1xは室温で保存してください。最良の一貫性を得るために、同じバッチの1xを使ってキャストし、ジェルを流すのが良いでしょう。異なるバッチを混同すると、ゲル界面の緩衝強度が変化します。希釈を1倍以下にしないでください。希釈すると異常な移動を招きます。

動作条件

ゲルの長さは25〜30 V/cmで使い、タンクの形状や熱挙動に応じて調整してください。高磁界の走行と同様に、電源の制限を確認してください。電流や電圧が下がった場合は、計器が電流を制限しているか電力を制限しているかを確認してください。ステインは柔軟で、塗った後にジェルやステインに加えます。どちらも効果があります。

• 安全性と安定性

連続運転や周囲温度が高いと、バッファー温度が上昇する可能性があります。必要に応じて、ユニットを冷却するか、氷の上に置いて解像度を保護します。精度を維持するために、バッファーを定期的に交換してください。50倍のストック溶液と1倍の作業溶液の両方を室温で保管してください。推奨条件下では、安定性は受領から少なくとも 12 か月です。いつものように、白衣と使い捨て手袋を着用してください。この製品は、専門家による研究用を目的としています。

現実世界の利益と開始方法

速度が安定すれば、下流のすべてが改善します。5〜10分のゲルなら、PCRのチェック、ライブラリーの調整、結紮の検証を日々の予定を崩さずに済みます。高スループットグループでは、より高速なゲルがキューの詰まりを解消し、スループットを向上させます。つまり、昼食前により多くのデータが入り、夜の再放送が減るということです。

Longlight Technology では、チームが仮説と結果の間のループを短縮できるように、このバッファーを構築しました。パイロット展開では、ラボは、従来のバッファーと比較して、より高いフィールドでのバンドのクリーンさ、ライゲーションへのスムーズなハンドオフ、ゲル抽出収量の向上を報告しました。再利用性と濃縮された50倍フォーマットは、1本のボトルで大いに効果があり、強力なバッファ容量により、実行中の交換が少なくなります。

迅速な核酸電気泳動のベストプラクティス

• 一貫性を保つために、同じ 1x バッチでキャストして実行します。

•25 V / cmから始めて、セットアップが許す限り30 V / cmに向かって移動します。

- より長い実行シーケンスでバッファー温度を監視します。必要に応じて冷やします。

• TAE/TBEキャストゲルを高速バッファーに落下する場合は、電圧を200 V未満に保ちます。非常に高い電圧は、そのシナリオで結果を歪める可能性があります。

• 輝く場所

短い検証実行、クローニング中の迅速なチェック、数十のPCRアンプリコンのスクリーニング、および従来のシステムでは通常クロールするRNAワークフローの高速化。チームが結果に基づいて行動するよりもジェルを待つ時間の方が長い場合、利益はすぐに得られます。

Finaの考え

核酸電気泳動の時間を10分に短縮する準備はできていますか?クリアさや回復を犠牲にせずに。サンプルのリクエスト、SOPテンプレートの入手、ジェルボックスの互換性確認など、ぜひLonglight Technologyにお問い合わせください。ボトルネックからゲルランをクイックチェックポイントに変え、実験をスムーズに進めましょう。