UVトランスイルミネーター:ジェル可視化に適したシステムの選択と使用方法

結果は問題があります。UVトランスイルミネーターです。染色されたゲルに紫外線を通すことで、DNA、RNA、またはタンパク質バンドを単純に読み取ります。オペレーターはゲルを検査し、写真を撮るか、後で使うために希望のバンドを切り取ることができます。

ほとんどの問題は電源スイッチ以外の原因に関係しています。これらは波長の不正確さ、照明や染色の不一致、長時間の露光、UV防護の欠如が原因です。

良いUVトランスイルミネーターのワークフローは、サンプルと機器の使用者への最小限の露出でクリアな帯域を提供すべきです。

UVトランスイルミネーターの仕組み

その後、ゲルは電気泳動され、肉眼では通常見えない分子断片を残します。染色対象の材料に付着または相互作用する蛍光色の染色液。染色されたゲルは照射された表面に移され、紫外線によって染料が励起され、目で見える蛍光を放出します。

暗い背景と明るい帯により、断片の大きさを推定したり、サンプルの強度を比較したり、増幅生成物を確認したり、ゲル抽出用の材料を探したりすることができます。

標準波長254、302、365 nmのUVトランスイルミネーターはいくつか存在します。単一波長を提供するものもあれば、二つや三つの波長を提供するものもあります。どの機器が最適かは、機器の種類や望む波長によって異なります。ゲル観察および電気泳動の応用は、302nm付近の幅広い紫外線を利用しています。

実際の用途の波長を選択してください

蛍光の強度、試料の損傷、染色適合性は波長の選択によって影響を受けます。

蛍光染色されたDNAおよびRNAゲルを観察する際には、一般的に高強度の信号を得られるため、302 nmの光源がよく用いられ、多くの既知の核酸染色剤がこの光源と共に使用可能です。定期的なジェルチェックや記録のための簡単な解決策です。

UVによるDNA損傷の減少が最強信号よりも重要であれば、365nm付近の長波UVを使用すると考えられます。サーモフィッシャーはDNAへの曝露を最小限に抑えることを勧めており、ゲルからDNAが回収される場合はより長い波長(約360 nm)の使用を推奨しています。

DNAゲルの日常的な観察に短波紫外線(約254 nm)を使用することは自動的とは考えるべきではありませんが、一部の実験用トランスイルミネーターは利用可能です。蛍光物質や実験室での用途に応じて使用に適しています。

したがって、最大波長は最も効果的な選択肢ではありません。それはそのステインに合い、次のステップのためにサンプルを十分に維持できるものです。

異なる色の光源には異なる色のジェルステインを使いましょう

トランスイルミネーターとジェルステインは一つの光学系として考えるべきです。

励起や放出の特性が異なる異なる種類の染料があります。染色は紫外線反射率が高く、青色光反射率が低い場合もあり、その逆もあります。カメラフィルターは放出された蛍光を通過させ、不要な励起放射線の通過を防ぐ必要があります。

新しいアッセイを行う前:

• 染料を励起させる波長はレケルです。染料を励起させる波長は「ルエケルズ」です。
• 写真用フィルターを使うかどうかの判断は、個々の写真家によって決まります。
• 染色物質(DNA、RNA、またはタンパク質)の特性
• ゲルを切るかどうかは、どのように記録されるのでしょうか?
• もし光源が新しい技術であれば、現在のイメージングシステムを使ってそれを捉える方法はありますか?

例えば、SYBR Safe染色ゲルは、適切な蛍光装置を用いてUVまたは青色光フィルターを用いて画像化できますが、臭化エチジウムイメージングに使われるフィルターは適さない場合もあります。

画像が薄すぎるだけでも、ゲル中のDNAが少なすぎるとは限りません。原因は、不適切な励起波長、誤ったカメラフィルター、使用された古いUVランプ、または部屋の光が強すぎるなどです。

DNAの損傷が回復する場合は、紫外線への曝露を制限してください

核酸は紫外線によって損傷を受けやすいです。これは、研究者がゲルからDNAバンドを抽出し、残りのDNAをクローニング、ライゲーション、シーケンスなどの後継用途で利用したい場合に重要です。

長時間の曝露はDNAの損傷やその他の損傷を引き起こし、回収されたDNAの品質に影響を与えることがあります。サーモフィッシャーは、長期間紫外線にさらされるとDNAに損傷が生じ、サブクローニングなどの下流応用に影響を及ぼす可能性があると指摘しています。

UV可視化が必要な場合:

1. ライトを点ける前に、切削工具と集水管を設置してください。
   1. クリアなバンドができる最低設定にしてください。
   1. 曝露は最小限に抑えるべきです。
   1. 可能であれば、UV光の波長を長く考えてみてください。
   1. 同じゲルを繰り返し見ないでください。
   1. 選んだバンドを記録し、ソースをオフにしてください。

クローン作成に適した青色光トランスイルミネーターは、特に感度の高いクローン作業により適している場合があります。青色光によって色が励起されることがあり、青色光によるDNAへの損傷は少ないことがわかっています。

照明均一性の確認

トランスイルミネーターは、観察対象エリアを均一に照らす必要があります。

表面の一方の側が他方より強い場合、同じ帯がゲル上の位置によって強度が変わります。これは、同じ実験室内でレーンを比較したり、画像を半定量的分析に用いた場合に特に重要です。

均一性はランプの状態、ランプの配置、フィルター、表面の清潔さ、そして機器の光学設計によって影響されます。UVPの文脈では、さまざまなバンドやレーンでの結果の再現性を得るために、均一な照明が重要です。

バンドの強さに左右する前に、必ず背景全体が均等かどうかを確認してください。同じゲルを表面の別の部分に移すことで、照明の問題が生じる可能性があります。

正しい視聴エリアを使いましょう

表面の照明面積はジェルを覆うのに十分な範囲で、余分なベンチスペースを取らないはずです。

小さなセルは標準的なミニゲルにはとても良いです。大きなプラットフォームは、大判ジェルや複数のゲルを並べて表示するのに適しています。市販のシステムには、通常約20 x 20 cm以上の異なる照明エリアを備えたものがあります。

すべてのジェルは表面に平らであるべきです。保護フィルムのしわ、バッファーの過剰、トレイの不均一さなどにより、バンドの反射やぼやけが生じることがあります。

視界を清潔に保ち、UVフィルターに対応した素材や洗浄剤のみを使用してください。画像は傷やシミ、乾燥したバッファー堆積物の影響を受けることがあります。

使用者を紫外線から守ることを忘れないでください

UVトランスイルミネーターは標準的な観測用ランプではなく、実験室での使用を想定した高強度の光源です。

紫外線への直接的または間接的な曝露は、目や皮膚の損傷を引き起こす可能性があります。スタンフォード大学の実験室安全ガイドラインには、トランスイルミネーター使用時の注意事項が挙げられています:トランスイルミネーターの使用時はアクセスを管理し、反射面をトランスイルミネーターから遠ざけ、皮膚と目を保護することを示す標識を掲示すること。

必ず機器に付属する保護用のトップ、シールド、または閉鎖された画像キャビネットを使用してください。ゲルを扱う検査室では、顔を覆い、手袋を着用し、実験用コートを着用し、皮膚にUVブロッカーを塗ることが求められることがあります。

普通の安全メガネが紫外線の波長を遮っているとは思わないでください。機器に指定された適切な防護具を着用し、検査機関の放射線安全規則を遵守してください。

安全なインターロックを備えた密閉型ゲル文書システムにより、より優れた露出制御が得られます。これは、開いたライトボックス上で作業するよりも効果的です。一部のシステムはUVモードで動作中にイメージングドアを開けることができません。

教育者は一貫した視聴ワークフローを確立すべきです

不要な変動を最小限に抑えるために使えるシンプルなトラックがあります:

• 電気泳動と染色 1. 電気泳動と1 染色。
• 染色が正しい波長であることを確認してください。
• ゲルトレイの外側が清潔で乾いていることを確認してください。
• 必要な紫外線の波長と強度を選びます。
• ジェルは中央の観察エリアに塗ります。
• 保護シールド/イメージングエンクロージャーを閉めてください。
• できるだけ短い露光時間で可視帯を作りましょう。
• 適切な放射フィルターを使って写真を撮ってください。
• ジェルを動かすときはUVライトを消してください。
• 使用後は表面を拭き取ってください。

複数の実験を行う場合、染みの濃度は同じで、イメージングフィルター、露光時間、明るさ設定、カメラ条件も同じであるべきです。

トランスイルミネーターをイメージングワークフローに接続してください

ユーザーがゲルの検査を必要としない場合は、ベンチトップトランスイルミネーターを使用できます。より要求の高い用途では、カメラ、ダークエンクロージャー、フィルター、画像解析ソフトウェアを含む完全なゲルドキュメンテーションシステムが必要です。

統合システムは画像撮影、バンド測定、記録、定期的なゲル分析に利用できます。Bio-Radは、制御された照明や自動画像取得・解析ソフトウェアを備えたゲルドキュメンテーションプラットフォームを特徴付けています。

決定は検査室が画像をどう扱うかによります。研究室では、教育室は明確な視覚的確認を必要とし、研究室は追跡可能な画像ファイル、一貫した露光、定量的なバンド解析を必要とするかもしれません。

光源は絶対に取り外さないでください

UVランプは点灯しているように見えても、時間が経つにつれて出力が減っていきます。強度を下げると、露出時間を延ばすことになり、その結果、一貫性が低下し、サンプルの露出量が増える可能性があります。

メーカーのランプメンテナンスガイドラインに従ってください。紫外線放射計は目視推定よりも客観的な測定手段であり、UVPは放射度測定が紫外線源の有効寿命を監視する適切な方法であると判断しています。

推奨されるならセットでランプを交換し、視聴フィルターを徹底的に清掃し、メンテナンス日程を記録してください。蛍光UVランプにも水銀が含まれていることがあり、地域の規定に従い有害廃棄物として処理・処分されるべきです。

結論

UVトランスイルミネーターをゲルの可視化に使う場合、迅速かつ鮮明に撮影できますが、良好な結果を得るには紫外線だけが明るくなければなりません。

波長は染色や下流の用途に適しているべきです。照明はできるだけ均一で、露光時間は短く、カメラフィルターは蛍光と同じで、ユーザーは光源からの紫外線から保護されるべきです。

適切な機器とは、ゲルのサイズ、染色方法、画像要件、サンプル回収のワークフロー、実験室環境の安全管理に対応できる機器です。

よくある質問

Q1。 UVトランスイルミネーターは何に使われているのですか?

主に電気泳動ゲル内で蛍光標識された染色されたDNA、RNA、またはタンパク質のバンドを可視化するために用いられます。また、ゲル記録システムにも組み込むことができます。

Q2。 DNAゲルには、以下のどの波長が一般的に使われていますか?

中距離UV(約302nm)の一般的な用途は、ゲルの日常的な観察です。最終的な選択は、染色と同じように、そして下流の塗布も同じであるべきです。

Q3。 紫外線はDNAを変異させるのか?

はい。長時間の曝露はDNA損傷を引き起こし、DNAのクローン性やその後継応用を低下させる可能性があります。

Q4。 どちらがより効果的ですか:ブルーライトとUVライト?

使用者への紫外線ダメージやDNA損傷が懸念される場合は、適合する染色にはブルーライトの使用が推奨されます。既知の染色でも、UVの方が励起効果が高い場合があります。

Q5。 なぜジェルバンドに弱点があるのでしょうか?

これは、サンプル濃度の低さ、不適切な染色、不適切な波長やフィルター、劣化したランプ、過剰な背景光、または染色の不十分なためである可能性が高いです。